Saltar ao contido principal
Inicio  »  Centros  »  Facultade de Farmacia  »  Información da Materia

P1022101 - Biotecnoloxía Celular (Módulo Central Materias Obrigatorias) - Curso 2013/2014

Información

  • Créditos ECTS
  • Créditos ECTS: 6.00
  • Total: 6.0
  • Horas ECTS
  • Clase Expositiva: 18.00
  • Clase Interactiva Laboratorio: 12.00
  • Clase Interactiva Seminario: 12.00
  • Horas de Titorías: 6.00
  • Total: 48.0

Outros Datos

  • Tipo: Materia Ordinaria Máster RD 1393/2007
  • Departamentos: Bioquímica e Bioloxía Molecular
  • Áreas: Bioquímica e Bioloxía Molecular
  • Centro: Facultade de Farmacia
  • Convocatoria: 1º Semestre de Titulacións de Grao/Máster
  • Docencia e Matrícula: Primeiro Curso (1º 1ª vez)

Profesores

NomeCoordinador
Benavente Martínez, Francisco Javier.SI
Martinez Costas, Jose Manuel.NON

Horarios

NomeTipo GrupoTipo DocenciaHorario ClaseHorario exames
Grupo /CLE_01OrdinarioClase ExpositivaSINON
Grupo /CLIL_01OrdinarioClase Interactiva LaboratorioNONNON
Grupo /CLIS_01OrdinarioClase Interactiva SeminarioNONNON
Grupo /TI-ECTS01OrdinarioHoras de TitoríasSINON

Programa

Existen programas da materia para os seguintes idiomas:

  • Castelán
  • Galego
  • Inglés


    • Obxectivos da materia
    O cultivo de células e a produción de anticorpos teñen numerosísimas aplicacións en investigación, diagnóstico, biotecnoloxía e industria. O principal obxectivo deste curso é que os alumnos familiarícense coas técnicas básicas para o cultivo de células e produción de anticorpos e que coñezan o amplo abanico de aplicacións prácticas que ofrecen estas técnicas.
    Contidos
    PROGRAMA TEÓRICO
    TEMA 1. INTRODUCIÓN AO CULTIVO DE CÉLULAS. Cultivo de células: vantaxes, desvantaxes e aplicacións. A habitación de cultivo. Equipamento necesario para cultivar células. Material que se utiliza para cultivar células. Tratamento e esterilización do material. Normas de seguridade.
    TEMA 2. MEDIOS E DISOLUCIÓNS PARA CULTIVAR CÉLULAS. A fase gaseosa. Medios basales: composición e preparación. Tipos de medios basales. Medios para cultivar células en suspensión e células de insectos. Medios para realizar marcaxes isotópicos. O soro e os seus compoñentes. Substitución do soro. Disolucións salinas isotónicas e disolucións de tripsina-EDTA. Esterilización de líquidos.
    TEMA 3. OBTENCIÓN DE CÉLULAS E VERIFICACIÓN DA SÚA AUTENTICIDADE. Introdución. Obtención de cultivos primarios. Obtención de células de tecidos específicos. Obtención de liñas celulares estables. Cultivo de células cancerosas. Bancos de células e outras fontes de obtención de liñas celulares. Verificación da autenticidade das células.
    TEMA 4. MANIPULACIÓN DE CÉLULAS EN CULTIVO. Cultivos en adherencia e cultivos en suspensión. Desdobramento dos cultivos. Determinación da concentración e da viabilidade celular. Conxelado, almacenamento e descongelado de células. Clonaxe de células. Fusión celular. Permeabilización de células.
    TEMA 5. A CONTAMINACIÓN MICROBIANA. Principais organismos contaminantes e causas da contaminación. Normas para previr contaminacións. Detección de microorganismos. Micoplasmas: métodos de detección. Eliminación de microorganismos. Contaminación viral.
    TEMA 6. PROLIFERACIÓN, DIFERENCIACIÓN E SELECCIÓN DE CÉLULAS. O ciclo celular. Enriquecemento de células en fases concretas do ciclo. Proliferación e diferenciación de células en cultivo. Obtención e uso de células marcadoras.
    TEMA 7. CULTIVO DE VIRUS. Importancia dos virus e do seu cultivo. Tipos de virus, estrutura e ciclo replicativo. Infección de células en cultivo. Efecto citopático. Infección e recollida de suspensións virales. Almacenamento de virus. Titulación de suspensións virales e clonaje. Concentración e purificación de viriones.
    TEMA 8. BACULOVIRUS. Características xerais dos baculovirus. Estrutura e ciclo replicativo. Uso dos baculovirus para combater pragas de insectos. Cultivo de células de insecto. Expresión de proteínas foráneas con baculovirus. Vectores baculovirales para a expresión de xenes en células de mamífero (transducción).
    TEMA 9. O SISTEMA INMUNE E A RESPOSTA HUMORAL. Barreiras defensivas e inmunidade innata. Inmunidade adaptativa. Estrutura e propiedades dos anticorpos. Interaccións antíxeno-anticorpo. A resposta inmune humoral. Resposta primaria fronte a un inmunóxeno. A resposta secundaria. Antíxenos independentes de células T.
    TEMA 10. SELECCIÓN E PREPARACIÓN DO INMUNÓGENO. Inmunoxenicidade dunha sustancia. Fontes de inmunóxeno. Obtención e purificación de proteínas. Deseño e obtención de haptenos peptídicos. Acoplamento de haptenos. Modificación de inmunóxenos.
    TEMA 11. OBTENCIÓN DE ANTICORPOS POLICLONALES. Introdución aos anticorpos policlonales. Elección do animal. Dose e forma do inmunóxeno. Uso de adyuvantes. Rutas de administración. Calendario de inxeccións. Sangrado e obtención do antisoro.
    TEMA 12. OBTENCIÓN DE ANTICORPOS MONOCLONALES. Concepto, vantaxes e desvantaxes dos monoclonales. Procedemento xeral de obtención de monoclonales. Obtención de anticorpos monoclonales en ratos. Obtención de anticorpos monoclonales en coellos. Fusión e obtención de hibridomas. Selección de células fusionadas e illamento de clons. Concentración de disolucións de anticorpos. Caracterización de anticorpos.
    TEMA 13. ALMACENAMENTO E PURIFICACIÓN DE ANTICORPOS. Almacenamento de disolucións de anticorpos. Purificación de anticorpos por precipitación. Purificación de anticorpos por cromatografía de intercambio iónico e de xel-filtración. Purificación de anticorpos con proteínas bacterianas. Preparación de columnas de inmunoafinidade e xeración de anticorpos secundarios. Purificación de anticorpos con anticorpos secundarios. Purificación de anticorpos específicos con antíxeno.
    TEMA 14. MARCAXE DE ANTICORPOS. Marcaxe de anticorpos con biotina e enzimas. Marcaxe con fluorocromos e partículas de ouro. Obtención de anticorpos monoclonales radiactivos.
    TEMA 15. FRACCIONAMIENTO CELULAR. Introdución. Homoxenización de células. Illamento de fraccións subcelulares. Obtención de núcleos e fraccións subnucleares. Obtención de mitocondrias. Obtención de vesículas e membranas.
    TEMA 16. USO DE ISÓTOPOS RADIOACTIVOS. Radioisótopos e emisión radiactiva. Isótopos máis utilizados en bioloxía. Características e detección da radiactividade. Aplicacións dos radioisótopos na investigación.
    TEMA 17. TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS. Inmunoprecipitación. Immunoblotting. Inmunoensayos. Inmunofluorescencia. Immunogold.

    PROGRAMA DE PRÁCTICAS
    PRÁCTICA 1. Exposición dun vídeo sobre cultivos celulares e visita ao laboratorio de cultivos celulares
    PRÁCTICA 2. Obtención dun cultivo primario de fibroblastos embrionarios de polo
    PRÁCTICA 3. Manipulación de células en cultivo
    PRÁCTICA 4. Infección viral de células en cultivo
    PRÁCTICA 5. Fraccionamiento celular, electroforesis e análise de proteínas por immunoblotting
    PRÁCTICA 6. Análise de proteínas por immunofluorescencia
    .
    Bibliografía básica e complementaria
    CULTURE OF ANIMAL CELLS: A MANUAL OF BASIC TECHNIQUE. R. I. Freshney. Terceira edición, 1994. Editorial Alan R. Liss, New York.

    CELL CULTURE FOR BIOCHEMISTS. R. L. P. Adams. Segunda edición, 1993. Editorial Elsevier.

    BASIC CELL CULTURE: A PRACTICAL APPROACH. J. M. Davis. Segunda edición, 2002. Oxford University Press.

    ANIMAL CELL CULTURE: A PRACTICAL APPROACH. J. R. M. Masters. Terceira edición, 2000. Oxford University Press.

    RADIOISOTOPES IN BIOLOGY: A PRACTICAL APPROACH. R. J. Slater. 1990. Oxford University Press.

    SUBCELLULAR FRACTIONATION: A PRACTICAL APPROACH. J. M. Graham and D. Rickwood. 1997. Oxford University Press.

    ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL. E. Harlow and D. Lane. 1988. Cold Spring Harbor Laboratory.

    GENE EXPRESSION SYSTEMS. J. M. Fernández and J. P. Hoeffler. 1999. Academic Press.

    Competencias
    Preténdese que o alumno:
    - Adquira información teórico-práctica sobre as condicións de traballo nunha habitación de cultivos, a preparación de medios e materiais, a obtención de cultivos primarios e o establecemento de liñas celulares.
    - Coñeza os diferentes sistemas que se utilizan para cultivar caracterizar e identificar células e para determinar a viabilidade celular e a contaminación microbiana.
    - Aprenda como se contan, pasan, clonan, conxelan, almacenan e desconxelan as células en cultivo.
    - Coñeza como se xeran hibridomas para a produción de anticorpos monoclonais e como se poden xerar anticorpos policlonais.
    - Obteña información xeral sobre a gran cantidade de aplicacións prácticas que ofrecen estas técnicas, tanto en investigación como en biotecnoloxía.
    Metodoloxía da ensinanza
    Clases presenciais con proxeccións de computador e curso en rede da USC Virtual, incluíndo resumos, diapositivas, vídeos e material de apoio.

    Tutorias, onde se resolverán as dúbidas expostas polo alumnos.

    Preparación e exposición de temas específicos por parte do alumno, baixo a supervisión do profesor.
    Prácticas de laboratorio, onde o alumno aprenderá a cultivar céllas e virus, e a obter cultivos primarios e anticorpos.

    Sistema de evaluación
    Exame teórico final, cuxa nota achegará un 70% á nota final

    Avaliación continua ao longo do curso (15%)

    Avaliación da preparación e exposición do tema (15%).
    Tempo de estudo e traballo persoal
    30 horas de clases teóricas.
    12 horas de prácticas de laboratorio.
    12 horas de seminarios.
    6 horas de tutorías.
    Recomendacións para o estudo da materia
    Asistencia as actividades propuestas.

    Consulta da bibliografía recomendada.

    Utilización das tutorias.